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            直播答疑 | 細胞培養答疑專場

            更新時間:2023-12-28  |  點擊率:253
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            12月14日的直播中,普諾賽直播間為大家介紹了細胞黑點、細胞狀態變形、細胞空泡、聚團、脫落等常見問題,直播回放請至B站 -“普諾賽生物"進行觀看。本期直播答疑,從直播間提問中,篩選出部分有代表性的問題,做了詳細解答。如有其他問題,也歡迎大家在公眾號留言,我們將在線解答。


            消化時間過長會損傷細胞嗎?

            消化時間過長會導致細胞膜蛋白的改變,最直觀的表現就是消化后第二天漂浮細胞很多或者貼壁慢。

            胰酶消化不掉的,二次消化對細胞損傷

            小還是機械吹打對細胞損傷???

            建議二次消化。細胞與細胞間的連接沒有通過酶切開的話,用移液槍進行吹散后細胞會被撕裂,直接導致細胞不貼壁甚至死亡。

            懸浮細胞聚團怎么處理?

            懸浮細胞聚團,要分情況進行處理:

            ? 原本就是聚團生長的細胞,不用干預,比如NK-92等就是聚團生長;

            ? 如果是非聚團生長的細胞,比如THP-1聚團了,要區分高密度和低密度。高密度可以輕輕吹散細胞后進行低速離心,去除里面夾雜的死細胞,正常傳代即可改善;

            ? 非聚團生長的細胞低密度時,聚團一般是細胞狀態不太好,需要調整狀態。排查是否有污染以及培養環境合不合適等問題,對癥改善后細胞即可正常生長,聚團改善;

            ? 剛復蘇的懸浮細胞也會出現聚團,一般是靜置培養和少動,期間可以用補液和半換液的方式培養,等細胞密度長起來,生長至對數生長期時,團塊問題也會改善。

            培養細胞系有很多無規則運動的小黑點,

            培養基未渾濁、變黃,細胞生長速度不

            變,形態變化不大。請問這是什么污染?

            這個情況比較符合血清沉淀或者細胞碎片分泌物之類的,一般不用過于關注,細胞能夠茁壯生長就可以了。

            豬肺泡巨噬細胞做實驗,一般可以傳多

            少代以內?

            如果是豬的肺組織提取的原代巨噬細胞,一般是終末分化的細胞,是不能增殖的,只能轉移到孔板做實驗。

            要收集細胞分泌的蛋白時,培養基中加

            不加FBS?應該怎么選擇?

            一般要做分泌蛋白都是不建議加血清的。血清里面可能有一些蛋白類未知成分,不排除會和實驗的目標蛋白有反應或者類似,所以通常都是用的無血清。

            提取的原代細胞不貼壁,怎么辦?

            原代組織分離后體外培養通常會有類似的問題,需要選擇合適的包被試劑進行輔助貼壁,這是原代提取比較常見的操作。

            如果對細胞的均勻度要求很高,有沒有

            好的方法可以提高鋪板時細胞的分布勻度?

            首先是細胞消化后盡量成單顆,鋪板的時候需要練習下手法,不要有旋渦產生,導致分布不均勻;除開鋪板手法外,細胞本身特性導致的容易聚團生長,可以嘗試包被培養瓶以后低密度接種細胞,可能會達到比較好的單層貼壁的情況。

            消化時胰酶要預溫嗎?水浴鍋預溫可以嗎?

            胰蛋白酶屬于酶制品,受溫度影響,反復的4℃- 37℃的溫度波動反而會導致酶失活,效果不好,所以不建議37℃復溫。4℃拿出來可以直接用,加入到細胞消化的時候放進培養箱就好了。

            我養的上皮細胞消化下來有很多像葡萄串

            一樣的細胞團,吹打也不能讓細胞分開。

            這種情況一般還是消化不充分導致,建議可以適當延長消化時間,待細胞與細胞間的連接打開后再進行吹散,一般是很容易吹散的。





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