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            細胞學堂 | 細胞培養中的小黑點,原來是它

            更新時間:2024-01-29  |  點擊率:167


            提起細胞培養,相信很多老師都遇到過培養液中的“小黑點",因無法確定它的身份而頭痛不已。本期細胞學堂將為大家揭秘這些黑點究竟是什么,幫助您快速上手開展實驗。


            01


            血清沉淀


            血清在融解過程中會產生大量的析出物,呈現出小顆粒樣的東西,甚至呈纖維樣,這是由于血清融解后導致的蛋白、鹽類物質的析出。





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            血清融解時混勻              血清靜置融解不混勻,出現黑點


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            顯微鏡下的血清沉淀物

            影響因素

            通常血清析出物的多少與融解方法有關。通過4℃冰箱解凍和溶解過程持續搖晃混勻,可以有效避免沉淀產生,而37℃靜置混勻則會有較多沉淀物析出。

            處理方法

            血清沉淀產生后應離心去除部分沉淀,否則在培養細胞時會看到較多黑點和雜質類物質,影響判斷。




            02


            細胞碎片或者分泌物


            在細胞代謝過程中,細胞凋亡后會產生一些分泌物的沉積和碎片物質,在顯微鏡下呈黑點狀。

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            顯微鏡下的細胞碎片及分泌物

            特征

            細胞碎片大小不均一,會隨著培養時間少量增多,但是不會呈倍增的趨勢增多;

            細胞狀態差時碎片會較多,狀態變好后黑點減少;

            細胞分泌物情況根據細胞有區別,有的細胞不產生分泌物,有的細胞會有較多的分泌物,往往是不影響細胞形態和增殖速度。




            03


            外源微生物污染


            當細胞被支原體、黑膠蟲或者細菌污染時,往往也會產生很多小黑點,尤其是細菌污染的情況出現時,這些小黑點甚至會導致培養液渾濁。

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            細胞支原體污染,黑點較多


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            細胞加入支原體清除試劑第二天,黑點顯著變少





            如何區分是否為污染?

            1

            外源微生物污染

            支原體和黑膠蟲污染一般表現為黑點增多并伴隨細胞生長速度變慢、死細胞增多等現象,通常加入對應清除試劑后細胞狀態會有顯著改善。

            2

            細胞分泌物/細胞碎片

            細胞分泌物和細胞碎片則不會因為加入清除試劑后而改善,會持續存在且不影響細胞增長。





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